文章来源：小木虫论坛
作者：Henry_jie编辑：颜惜
领到毕业证那一刻，我傻傻地问了一下，“这就毕业啦？就这么简单？”几个工作人员忽然笑了，“就这么简单呀，要不还要怎样？”有点恍惚，有点不知所措，喃喃自语地远离这繁华的人群，一个人拿着毕业证在林间的小道中悠悠地走着。
研究生，我学到了什么？我得到了什么？不同于本科时的无知，大学毕业没有什么感觉，只是一个毕业而已，可此刻我却无法平静。
研一在北京总部学了一年的理论课，教课的老师都是业内的大牛，大学所用的课本都是由他们编纂的。昔日看着他们编著的课本，觉得都是精华，都让人很受用，却想不到有一天可以在课堂上聆听他们的本人授课。十几位老师，印象最深的当属北大的罗教授，他是生物信息学领域里的专家，是一位非常严谨而又有点可爱的老先生（其实年纪不大，刚六十左右），教授我们生物信息学。他知识渊博，身体力行，严格要求学生，并且尽可能地为学生创造一切可能创造的学习环境。生物信息学课上，几乎是手把手地教，一步一步地展示，甚至因为学校的网路慢，最后还带着学生到北大计算机系上课。他和他的团队还创建了ABC网站，把生物领域里的各类网站整合在一起，很适合人们的查询。只是，他总是充满着无奈。他是一个思想超前的人，也有许多想法，多年前就想与人共同为中国的生物信息学创建一个国际间的联盟，只是因无人支持作罢，后来就著书立传。十天的授课，很仓促，他也很无奈，只希望在较短的时间里把知识输送给学生，至于他们能掌握多少，就靠自己的理解程度了。
在北京时，我接待了导师的一个美国友人，却也闹出了不小的笑话。他是一个地道的美国人，讲着一口快速迅疾的美式英语，却不会说一句汉语。我呢，读写英语没问题，说也能说一些，虽然口语不行，但足够外国人理解。听可是最大的弱点，中式英语多少还能理解，英式英语也能勉强懂一点儿，至于浪漫的美国人说的英语，我只能望尘莫及——太快了，还没明白过来，对方就已经说完了。于是，出现了一个最为尴尬和不合格的导游——随身携带着纸片，老外说话我没听懂时，就让他写下来，然后用我蹩脚的中式英语回答（他也能懂）。就这样，我竟然带着他在北京城玩了三天，最后又用我洋洋洒洒的中式英语写了一篇四千多字的“ChineseIntroduction”送给他做礼物。几天下来，我的英语口语和听力似乎都有了很大的提高，那三天，也趁着大好的机会，大胆地展示了我的杰式英语（现在想想，丢人都丢到国外了）。
从北京离开回到研究所时，我的科研生涯才算是刚刚开始。在这里，我遇到了许多值得我敬佩、对我帮助许多的老师同学，他们都是值得我感激的人。
我导师，五十多岁的人了，为了我的试验，不惜亲自下基地操刀做手术并指点我，让我学到了Sikadeer人工授精（技术要领知道，操作不熟）、动物静脉采血、睾丸穿刺、活体采卵、采精、冻精，这些都是从导师那里学到的，那里的一切都是导师赠予的，导师之恩无以言表。
胖老哥四十多岁的人了，学习热情不减，本专业为计算机编程，是个通才，教书可以，维修电器可以，做生物实验不比年轻人差，从头做起，繁殖技术试验他都精通，而且还独自发明了Sikadeer采精器并申请专利，甚至远销上海等江南之地（我曾见证了他把图纸变成零件、再组装成一个完整采精器的过程，一整天呆在实验室，不为外事所扰，专注于一件事，我也跟着学，只是没学会）。小鼠冲胚、小鼠结扎（我的成功率不高，死亡率较大）、小鼠人工授精、胚胎融合等都是从他那里学到的，他是我最信赖的一个人，也曾经对他许下诺言：他日杰若发达，汝子寻我，我必助他一臂之力。
瘦老哥将近五十岁的人了，已贵为教授，依旧在不停地耕耘，凌晨一两点尚在办公室书写材料，做实验亲力亲为，是一个人把理论与实践推广结合起来的老师。团队首席，归国学者，学校“千人计划”一员，理论先进、技术高超，是年轻科研工作者中的佼佼者，是我硕士课题的规划者和支持者。
大师姐，中科院博士，是我的小导师，我一身生物本领、技术全是她所教，科研习惯、科研准则也是从她那里学到的，论文书写、实验指导全赖于她，大师姐之恩无以言表。大师兄，异地他乡之长兄，生活关心、迷茫解惑、节日庆祝，让我感受到家的温暖。实验室其他老师、师弟师妹都曾在我试验过程中指导或帮助过我，让我受益匪浅。虽然那些个场景都已经过去了，但这份恩情永远存在于我心中，他们是我在他乡的朋友，是值得我回忆和记住的人。
试验技术呢？我学到了什么？又有哪些值得自己称道和与人说的呢？
生殖细胞的捡卵、培养这些是动物繁殖最基本的。最初培养液是自己配制的，按照配方在无菌的环境下配制，固体的称量、液体的称取，高精度的天平、准确适当的量筒，差一毫多一厘都是不行的，培养液的PH值、渗透压都要测定，激素的添加、生长因子的添加，每一种药品都是至关重要的，都要谨慎对待。第一次配制，先后配了四次才得到成功，后来买成品，也算是减轻了一些负担。用捡卵管捡卵时，练得嘴肿时才算是熟练捡出。超净工作台无菌操作，细胞培养箱无菌环境，从这一处移到另一处，每一环节都要高度重视。至于冲胚，则是为了获得特定时期的胚胎，主要在小鼠上应用。先给小鼠做超排处理，先打PMSG（孕马血清促性腺激素），48h后打HCG（人绒毛膜促性腺激素），然后公母合拢交配（0日），第二日（1日）检查母鼠生殖道，查看是否有栓（公鼠精斑），有栓者为交配成功者，下午取输卵管，从膨大部扎卵可获得1细胞（显微镜下呈双核），2日从壶腹部冲卵，可得2细胞，3日四细胞（带子宫冲），4日八细胞~十六细胞，6日左右可得囊胚（个人实验所得结果，不代表标准）。体外冲胚可获得体内成长的胚胎，较体外培养的胚胎更能反映问题。胚胎融合则是将两个胚胎融合在一起，可制作嵌合体动物（生命研究），也可制作联体动物（也不知道有啥意义），十六细胞时去透明带（酶消化和机械去除两种方法），将两细胞亲密接触，让其自然融合在一起，待其成为一体后即可做后续实验（尝试实验，不曾深做）。
体细胞的培养，取组织，75%酒精消毒，PBS（磷酸缓冲液，实验室常用品）洗涤，胰酶消化，可铺块培养，也可全消化培养，后者较好，胶原酶消化强度更大，不易溶解组织可用胶原酶消化。待长至75%丛聚时，可传代培养。做药物对细胞影响效果实验时，可以检测细胞增殖活性、细胞凋亡、细胞周期等指标，分别反映药物对细胞不同生理功能的影响。细胞增殖活性可用MTT或CKK试剂盒结合酶标仪检测，细胞凋亡和周期可用AnnexinV-FITC/PI结合流式细胞仪或者共聚焦显微镜检测，结果用FlowJo软件或者ImageJ软件分析。操作容易损失细胞，一定要保证细胞数量。不可用细胞刮刀刮细胞，用胰酶消化就可。胰酶成品较好，自己配制效果不好。冷冻、测定活力、解冻是细胞长期保存的环节。
DNA的提取可以做普通PCR（聚合酶链反应），也可以测序等，测定血缘关系。RNA的提取，可以反转录成cDNA，进而做荧光定量PCR，探索不同基因的表达水平。蛋白提取可以做Westernblotting，检测不同蛋白表达水平，这里需要用到各类抗体，一抗需要是辣根酶标记（HRP）的抗体，二抗作用是抗一抗，与一抗反应进而表达。免疫荧光可以做细胞的蛋白/基因定位，或者表达强弱，也需要抗体，一抗是需要有这个符号（H＋L）的抗体（啥意思，忘了）。ELISA实验、免疫组化、分子克隆、细胞转染等都是最基本的分子学实验，也是实验过程中常用到的，都应该基本掌握。基因的表达检测需要设计引物，引物的设计及测序结果的查看，可用NCBI网站上的生物工具结合Primer5、DNAStar、MEGA6.0等软件进行。图形的整合修理可借助Photoshop或者AdobeIllustrator软件进行，图标的绘制则可用GraphPadPrism进行，若Excel表格玩得转，它里面的用途可不少（我不太喜欢用它）。
动物克隆是一个传统热点，它的基础是显微注射，这是生殖领域里的一个重要手段，理论和技术都要掌握，技术需要通过大量地训练可实现（我只掌握了理论，技术还真没有掌握）。基因编辑和基因敲除是一个新热点，与未来生命研究息息相关，它的基础是生殖细胞的培养和显微注射。干细胞的研究、细胞骨架的研究、蛋白功能的研究本人认为将很快超越克隆等传统热点，成为更大的热点（过去已经是热点了），是生命领域里又可创造科学家的摇篮（个人观点），未来可作为选专业的参考。目前，生命领域里二代测序已经广泛推广，三代测序也缓缓诞生，将测序技术与疾病诊断技术集合也早已成为一个热点，生命科学研究者可着重求治白癜风偏方白癜风的治疗费用
